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兽医临床诊疗技术 实训十四葡萄组培快繁

书名:组培快繁生产技术  作者:张娟  本章字数:698 字  创建时间:2017-01-05 09:59

一、实训目的

通过实训掌握葡萄的组织培养和快繁的方法及流程。

二、实训条件及用具

材料:生长旺盛的葡萄植株。

用具:超净工作台、高压锅、天平、量筒、烧杯、镊子、剪刀等。

试剂:75%酒精、0.1%升汞、MS培养基+BA1.5mg/L+NAA0.01mg/L、饱和洗衣粉水。

三、实训步骤

(一)外植体选择、预处理和消毒灭菌

选取田间生长旺盛的葡萄植株,取其上部嫩梢,装入无菌广口瓶中,在实验室内将嫩梢除去幼叶,剪成1~2cm的茎尖或带芽茎段(以嫩梢上部3~4节茎段较好),用饱和洗衣粉水浸泡10分钟,流水冲洗1~2小时,将冲洗后的茎段,放置超净工作台上,用75%酒精浸泡10分钟,无菌水冲洗1次,再用0.1%升汞消毒8分钟,最后无菌水冲洗5次。

(二)初代培养

将茎尖或茎段接种于诱导培养基上。培养基为MS培养基+BA1.5mg/L+NAA0.01mg/L。

培养条件:温度25℃~28℃,光照强度1800lx,光照每天14小时。

(三)继代、增殖培养

选取较大的不定芽,转接到MS培养基+BA0.4mg/L~0.6mg/L+NAA0.01mg/L的继代培养基上,经3周左右小芽即可长成4cm左右高的无根苗,完成第一次增殖。继续用同样的培养基进行继代培养,葡萄在此继代培养基中生长繁殖很快,每4周可重新继代一次,直到扩增到所需芽苗数量。

培养条件:光强2000~3000lx,光照每天14~16小时或连续光照,温度25℃~28℃。

(四)试管苗生根培养

从已继代的瓶苗中选取3~4cm高的壮苗,在无菌滤纸上用解剖刀从瓶苗基部切去3~5mm,将小苗转到1/2MS+NAA0.1mg/L~0.3mg/L生根培养基上,一般生长7天后,有一些苗的基部长出白色的突起,大约30天后,这些突起可以发育成0.5cm以上的幼根,培养条件同增殖阶段。

(五)葡萄试管苗驯化移栽

四、实训报告

将本次实训结果整理成实训报告,并探讨提高葡萄小植株移栽成活率的措施有哪些。

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